產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
【目的】與獎賞系統(tǒng)失調(diào)相關的情緒性疾病，如快感缺乏造成的抑郁癥、焦慮癥、自 閉癥，或過度追求獎賞刺激造成的成癮、強迫癥等疾病,嚴重影響患者日常生活。這類精神障礙疾病患病率高，發(fā)病機理不清，目前對其仍缺乏有效治療方法。2019 年中國精神衛(wèi)生調(diào)查(CMHS)表明，除老年期癡呆外，6類精神障礙的終生加 權患病率為16.6%,即七分之一的居民在一生中發(fā)生至少一種精神障礙疾病。研 究這類精神障礙疾病的發(fā)病機理，尋找有效的治療方法，是神經(jīng)科學界研究的重占和執(zhí)占。
1、位置偏好實驗介紹及其應用
在以小鼠為模型的研究中發(fā)現(xiàn)，和人類一樣，小鼠也*不在追尋“快 感”，這種“快感”情緒的表現(xiàn)包含客觀性和主觀性兩個方面。現(xiàn)代神經(jīng)生物學 的方法使我們能觀察到一些客觀反應的變化（比如利用電生理、雙光子鈣成像技 術等觀察神經(jīng)元活性變化），隨后大腦通過皮質邊緣環(huán)路將一些客觀反應轉化成 一種愉悅情緒的主觀感受，進而產(chǎn)生相應的行為變化。哺乳類動物大腦的一項基 本任務就是對環(huán)境刺激的情感或動機效價進行評價，即判斷是有“利”或有“弊” 的環(huán)境，從而迅速做出靠近（approach）或者逃避（avoidance）的行為反應。在對小鼠情緒反應的研究過程中，經(jīng)常會選擇一些基礎的行為學范式來對動物在 實驗過程中出現(xiàn)的各種不同愉悅或厭惡情緒主觀反應的判斷。比如實時位置偏好 （Real-time Place Preference, RTPP）、條件位置偏好（Conditioned Place Preference, CPP）等，根據(jù)動物對環(huán)境的選擇性靠近或逃避的主觀行為反應，來衡量環(huán)路刺激 所造成的客觀變化。
神經(jīng)科學家們致力于找到一些與獎賞或厭惡情緒直接相關的腦區(qū)和神經(jīng)環(huán) 路，建立因果關系，為疾病治療找到新方法。如找到一些獎賞情緒相關腦區(qū)，通 過激活該腦區(qū)或環(huán)路產(chǎn)生增強的“偏好”反應（如“靠近”等），或者是一些厭 惡情緒相關腦區(qū)，通過激活相應腦區(qū)或環(huán)路之后，使所見的“偏好”反應減少（如 產(chǎn)生“逃避”行為）。
2、位置偏好實驗的分類
常見的位置偏好實驗包括條件位置偏好和實時位置偏好。
條件位置偏好（CPP）是巴甫洛夫條件反射的一種形式，用來測量動物對某 種物體或環(huán)境的一種動機行為。主要原理是通過測量動物在與刺激相關的區(qū)域停 留的時間，來推斷出動物對刺激的喜愛或厭惡程度。
經(jīng)典的條件位置偏好箱由不同環(huán)境的三個區(qū)域組成，一般分為刺激區(qū)、非刺 激區(qū)和中間區(qū)。在以往的研究中，條件位置偏好箱被廣泛的用于研究各類藥物/ 酒精成癮的形成、消退、恢復過程。主要做法是將藥物等刺激與條件位置偏 好箱一側箱體進行多次偶聯(lián)匹配刺激，經(jīng)過一段時間的訓練之后，小鼠對匹配的 環(huán)境產(chǎn)生喜愛/厭惡，就會表現(xiàn)為在刺激區(qū)停留時間更長/更短。也可以根據(jù)實驗 目的對其中一些環(huán)節(jié)進行改變，探索成癮模型形成的條件等。
由于現(xiàn)代神經(jīng)科學的迅速發(fā)展，光遺傳學已經(jīng)廣泛運用于神經(jīng)科學的研究， 一種基于光遺傳學技術的條件位置偏好模型被廣泛使用，它被稱為實時位置偏好。實時位置偏好通過實時激活/抑制相關神經(jīng)環(huán)路，觀察動物位置偏好的差異，從 而直觀判斷刺激環(huán)路是否參與獎賞厭惡調(diào)節(jié)。
以上兩種方法通常都以小鼠或大鼠為研究對象，本文中探索ECT環(huán)路是否參 與編碼偏好行為，用到了實時位置偏好行為學模型。
主要材料和設備
| 行為測試箱 | |
| 攝像頭 | 上海欣軟 |
| 攝像頭支架 | |
| 采集卡 | 上海欣軟 |
| SuperMaze動物行為分析軟件 | 上海欣軟 |
| 473nm藍光激光器 | 杭州紐頓 |
| 75%酒精 | 鼎國 |
3、CPP實驗方法
采用的實時位置偏好(RTPP)包括連續(xù)兩天的實驗。
第Yi天為基線檢測，每只小鼠從中央箱放入之后，開始三箱的自由探索， 每只小鼠探索時間為lOmin,軟件將自動記錄小鼠運動軌跡、平均速度以及在 各箱停留的時間、進入次數(shù)等參數(shù)，將其結果記為baseline。
第二天為RTPP測試階段，任意選定一側環(huán)境箱為刺激箱(stimulate chamber),將小鼠放入中央箱，讓其自由探索，每當小鼠重心進入zhi定的刺激 箱一側時，手動給予小鼠473nm LED光照。RTPP階段，每只小鼠探索時間為 lOmin,利用欣軟公司supermaze軟件分析系統(tǒng)，自動實時自動記錄小鼠運動軌 跡、平均速度以及在各箱所停留的時間、進入次數(shù)等參數(shù)，將其結果記為RTPP。
(根據(jù)文獻參考以及腦區(qū)實際神經(jīng)元放電模式，不同腦區(qū)給予光照刺激的刺 激頻率(frequency)、脈沖寬度(pulse width)等略有差別，BLA、NAC區(qū)均 給予雙側20Hz, 15ms刺激。每次實驗前，需用光強檢測器檢測光纖末端輸出 光強，以保證效率，本文實驗光纖末端光強為10mw左右。同時為了避免長時 間光照造成的光損傷，每個循環(huán)連續(xù)給光％后，將有2s停光間歇期，即(8s- on-2s-off)的策略)。
4、注意事項
4.1 實驗開始前一周，開始每天輕微撫摸小鼠，使小鼠熟悉實驗員氣味，熟 悉被抓弄、撫摸等。
4.2 如遇冬季或夏季，每次實驗前，提前將行為學室空調(diào)打開，避免不適宜 溫度影響小鼠行為表現(xiàn)。
4.3 每次實驗前，小鼠先放入行為學室適應半小時以上。
4.4 每只小鼠實驗結束后，應用75%酒精*清潔實驗箱，避免小鼠行為結 果受到上一只小鼠的氣味影響。
4.5 小鼠應該面朝墻壁放入中央?yún)^(qū)，減少人為因素對小鼠行為狀態(tài)的影響。
4.6 每次實驗的時間點應該固定，并且選定一個light cycles (7:00-19:00) 或者是black cycles (19:00-次日7:00),避免由于實驗時間點不同而影響小鼠 的基礎運動水平，造成實驗結果偏差。
光遺傳實驗時，每次實驗前用無水乙醇清潔光纖接口，避免接口被臟污 覆蓋，影響通光率。每次實驗開始前，需測定激光是否穩(wěn)定，以及光強是否達 到設置標準。給予473nm LED光照激活刺激時，應避免連續(xù)長時間給光造成光損 傷，連續(xù)給光一段時間后，最hao設置適當時間的停光間歇期。
如果您也對動物實驗感興趣，歡迎關注和推薦關注\/信公眾號：bioviewer，專注于動物神經(jīng)科學與行為學的實驗知識的方法傳播與分享交流，您可以推薦給您身邊的朋友、同學以及老師，我們會定期更新您需要的相關實驗方法的視頻和文章，希望能對大家?guī)韼椭?/span>
